肉的宰后嫩化关键归因于肌原棉棉食物纤维节构的的弄坏，肌原棉棉食物纤维节构的是由内源性淀粉酶溶解酶生物光降解肌原棉棉食物纤维和组织组织神经血细胞膜骨架淀粉酶导致的的。与十几年来时不时是了解对象的钙淀粉酶酶的不同，胱天淀粉酶酶（caspases）近变为感动手水平语录题。胱天淀粉酶酶在组织组织神经血细胞膜凋亡的进行阶段性起着至关重点村的效果，这之中caspase-3在人死了淀粉酶溶解中的效果是各种面和有难度的，所以值当进每一步探索。S-亚硝基化采用调接钙发挥、能量是什么新陈代谢、淀粉酶质生物光降解和组织组织神经血细胞膜凋亡来调接肉肥，以及嫩度和持水水平。下一步探索发展S-亚硝基化可以调整忽略线粒体的caspase-3级联的反应，这将是腹肌组织组织神经血细胞膜凋亡和羊肉产品品质变动的原因分析。caspase-3的探索重点村是其与组织组织神经血细胞膜凋亡的干系，尽管，不多有探索浅谈S-亚硝基化调接caspase-3的体制。

2024年9月由长沙畜牧业二本大学张万刚教学队伍在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱动物为该研究提供了亚硝基化掩盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

英文版关键词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2026年危害指数公式：5.7

发表论文时间段：2024年9月

客服机关单位：南京农业大学

深入分析的材料：蛋白

拜谱能提供水平：亚硝基化修饰组学

技艺路线规划：

一、设计报告

01.Caspase-3抗逆性

现下尚不看不清楚NO对caspase-3的能够抑做用是归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异酸度梯度方向的GSNO用作外源性NO生产，以引发caspase-3的身体S-亚硝基化。效果揭示，与没了GSNO的组不同于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3催化活力偏态减轻（图1），与仍然有关报道同样。GSNO进行处理减轻caspase-3催化活力的不确定原由仍进一步具体分析。

图1 不相同盐浓度的GSNO外理对caspase-3化学活化的损害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化成度

探析Caspase-3的亚硝基化系数，以相一样GSNO对Caspase-3的表现性。经GSNO整理后，检验到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化的强度加大（图2）。哪些没想到表述，外源性GSNO培养教育可完成介导caspase-3的身体外S-亚硝基化。惹人惊喜的是，在未GSNO具备的相较比较组中检验到1个很弱的S-亚硝基化带，这表述caspase-3也许 發生内源性的S-亚硝基化。凡此种种，本探析中caspase-3的S-亚硝基化系数较高，而caspase-3的化学活化拉低，这与很久的探析一样。那么，caspase-3的活性朋友S-亚硝基化呈现位点尚不清晰，还所需进一歩的打磨。

图2 GSNO处里对caspase-3S-亚硝基化级别的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。白色标签的队列表明S-亚硝基化肽，灰色标签的C表明S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3生物降解结血清

结球蛋清酶酶质酶是本身首要的細胞核骨架球蛋清酶酶质酶，在保护肌細胞核格局的格局全部性和缩紧性等方面起着首要使用，探究S-亚硝基化caspase-3对结球蛋清酶酶质酶生物生物降解的的敏感度高和理性具有着着首要重大意义。与Std（未用胱天球蛋清酶酶质酶酶-3和GSNO孵育的初使肌钎维球蛋清酶酶质酶）组对比，0 μM GSNO组（肌原钎维和caspase-3的孵育，无GSNO）的全部结球蛋清酶酶质酶纯度相关系数削减，警告caspase-3对结球蛋清酶酶质酶具有着着未知的球蛋清酶酶质酶水解反应程度。在GSNO孵育后，全部结球蛋清酶酶质酶的纯度非常明显不断增加（P < 0.05）。不仅如此，当GSNO氧化还原电位身高时，全部结球蛋清酶酶质酶的纯度不间断调涨（P < 0.05）（图5）。这种察觉得出结论，SNO表达的caspase-3以平行依懒的行为调控结球蛋清酶酶质酶的生物生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3化学降解肌钙核蛋白-T

肌钙淀粉酶-T (TnT)是原肌球淀粉酶上下调整进行手臂肌肉收縮的丝条的须要肌原棉棉氯纶淀粉酶。TnT的可溶解特性是查测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化因素下，caspase-3对TnT的可溶解症状下图6图示，与Std组（只含caspase-3和GSNO的肌原棉棉氯纶）优于，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写有效添加，表示caspase-3参与到了TnT的可溶解，除此之外，caspase-3与GSNO的孵育使得30 kDa TnT骤降。在100和200 μM GSNO组中间无查测到突出的对比(P > 0.05)，而当GSNO的密度到达400 μM 时，该场面描写有效治理和改善(P < 0.05)。以下看见表示了SNO呈现的caspase-3对TnT可溶解的治理和改善的功效。结淀粉酶和TnT是caspase-3的敏感脆弱底物，而GSNO外理大幅度变低caspase-3的生物会使得肌原棉棉氯纶淀粉酶可溶解阶段大幅度变低。笔者认为所写，NO介导的S-亚硝基化可不可以采用呈现半胱氨酸残基来上下调整caspase-3的生物，借以进那步导致其对结淀粉酶和TnT的淀粉酶油脂水解能力素质，关键在于导致鸡肉品级。

图6. S-亚硝基化caspase- 3化学降解肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本调查此次研究S-亚硝基化对caspase-3突显的的印象和其陆陆续续对羊肉肌原玻纤板离体光降解的的印象。核核球蛋白S-亚硝基化不错突显caspase-3的半胱氨酸残基，得以引致caspase-3催化活性减低，进三步治理和改善了其对羊肉肌原玻纤板核核球蛋白的核核球蛋白蛋白质水解性能。

三、拜谱个人心得体会

深入了解利用了酶活测试，亚硝基化装饰组学了解，WB等测试措施，发展蛋清质酶酶S-亚硝基化能装饰caspase-3的半胱氨酸残基，这造成的了caspase-3活力的有效降低，齐头并进一步骤克制了其对牛羊肉肌原玻纤蛋清质酶酶的蛋清质酶酶电离工作能力。本深入了解为诠释蛋清质酶酶质亚硝基化对吃起来的自我调节规则供给了了个新的焦距。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的氨基酸质组学、掩盖氨基酸质组学、消化吸收组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸型号厂品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total氧化的完美重现、分散巯基，欢迎大家咨询！

基准专著：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663